如何用 cy5 標記 3-吲哚丙酸?
2024-10-28
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cy5標記3-吲哚丙酸|CY5-3-Indolepropionic acid
以下是一種可能的用 Cy5 標記 3 - 吲哚丙酸的方法,但具體操作可能需要根據實際情況進行調整和優化:
一、材料準備
1.3 - 吲哚丙酸。
2.Cy5 熒光染料及相應的活化試劑(如 NHS-Cy5,N - 羥基琥珀酰亞胺活化的 Cy5)。
3.適當的緩沖液,如磷酸鹽緩沖液(PBS)。
4.透析袋或脫鹽柱。
5.有機溶劑如二甲基亞砜(DMSO)(用于溶解某些試劑)。
二、操作步驟
1.溶解與活化
將 3 - 吲哚丙酸溶解在適當的緩沖液或有機溶劑中,得到一定濃度的溶液。
稱取適量的 NHS-Cy5 溶解在 DMSO 等有機溶劑中,確保其全溶解并活化。
2.標記反應
將活化后的 Cy5 溶液緩慢滴加到含有 3 - 吲哚丙酸的溶液中,在適當的溫度(如室溫或 37℃)下攪拌反應一段時間(幾小時到過夜)。反應體系的 pH 通常維持在弱堿性條件有利于反應進行,可根據試劑說明書進行調整。
3.純化
反應結束后,可以使用透析袋在適當的緩沖液中進行透析,以去除未反應的 Cy5 和其他雜質。或者使用脫鹽柱進行純化,按照產品說明書進行操作。
4.檢測與鑒定
使用紫外 - 可見分光光度計和熒光光譜儀等儀器對標記后的產物進行檢測,確定 Cy5 標記的效率和產物的純度。
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