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如何通過熒光分光光度計檢測 FITC-ConA 復合物的濃度?

2024-10-24 [123]

FITC-ConA|FITC-刀豆球蛋白A

以下是通過熒光分光光度計檢測 FITC-ConA 復合物濃度的步驟:

一、準備工作

1.儀器準備:

確保熒光分光光度計處于正常工作狀態,預熱儀器至穩定。

根據需要設置合適的激發波長(一般 FITC 的激發波長在 490 - 495nm 左右)和發射波長(一般在 520 - 530nm 左右)。

2.標準品準備:

準備一系列已知濃度的 FITC-ConA 標準品溶液。可以通過精確稀釋高濃度的 FITC-ConA 儲備液來制備不同濃度的標準品。

3.樣品準備:

將待測的 FITC-ConA 樣品溶解在與標準品相同的緩沖溶液中,確保樣品溶液均勻且無顆粒雜質。

二、建立標準曲線

1.測量標準品熒光強度:

依次將不同濃度的 FITC-ConA 標準品溶液放入熒光分光光度計的樣品室中。

測量每個標準品溶液在設定的激發和發射波長下的熒光強度。記錄每個標準品的熒光強度值。

2.繪制標準曲線:

以標準品的濃度為橫坐標,對應的熒光強度值為縱坐標,繪制標準曲線。

可以使用線性回歸等方法擬合標準曲線方程,以建立濃度與熒光強度之間的定量關系。

三、測量樣品濃度

1.測量樣品熒光強度:

將待測的 FITC-ConA 樣品溶液放入熒光分光光度計的樣品室中。

在相同的激發和發射波長下,測量樣品溶液的熒光強度。記錄樣品的熒光強度值。

2.計算樣品濃度:

根據樣品的熒光強度值,結合標準曲線方程,計算出待測 FITC-ConA 樣品的濃度。

四、注意事項

1.儀器校準:在進行測量前,確保熒光分光光度計已進行正確的校準,包括波長校準和熒光強度校準。

2.溶液穩定性:FITC-ConA 溶液應在穩定的條件下保存和測量,避免光照、溫度變化和長時間放置導致的熒光強度變化。

3.背景扣除:測量空白溶液(不含 FITC-ConA 的緩沖溶液)的熒光強度,并在測量樣品和標準品的熒光強度時進行背景扣除,以消除背景熒光的干擾。

4.重復性測量:為提高測量的準確性,可對每個樣品和標準品進行多次測量,取平均值作為最終的熒光強度值。

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